izvor podataka: poirot

Citomegalovirusni odjeljak za sklapanje viriona

Cytomegalovirus assambly compartment


Citomegalovirsuna (CMV) infekcija izaziva opsežno preuređivanje membranskog sustava stanice koje završava stvaranjem citoplazmatskog odjeljka za sklapanje viriona (virion assembly compartmet, cVAC). Preuređivanje započinje rano tijekom infekcije reorganizacijom ranih i reciklirajućih endosoma te Golgi aparata u perinuklearni agregat koji tvori jezgru cVAC. U kasnoj fazi infekcije, jezgra cVAC se nadograđuje ekspandiranim vakuolarnim odjeljkom oko agregata virusnih tegumentnih proteina koji se nakuplja virusne glikoproteine. Nakon stupnjevitog prolaska nukleokapside kroz strukturu cVAC, u tom odjeljku odvija se konačno sklapanje viriona i iz tog odjeljka novostvoreni virusi se oslobađaju iz stanice. Biogeneza tog odjeljka kao i mehanizmi oslobađanja viriona slabo su karakterizirani. Cilj ovoga projekta je utvrditi fenotipska obilježja odjeljka koji nakuplja virusne glikoproteina i dokazati da se u njemu odvija konačno sklapanje viriona. Na membranama odjeljka analizirati će se imunofluorescencijom vezanje Rab i Arf, glavnih regulatornih proteina koji oblikuju membranske strukture stanice, njihovih regulatora (GEFova i GAPova) i efektora. Sadržaj fosfoinozitida u membranama analizirat će se pomoću privremeno izraženih fluorescentnih domena za vezanje fosfoinozitida a lipidne domene pomoću fluorescentnih rekombinantnih aegerolizina. Usporedo, uporabom Clic-iT tehnologije, razvijat će se nova metoda za vizualizaciju viriona kako bi se mogli pratiti procesi sklapanja i oslobađanja viriona. Karakterizacija cVAC kao i sklapanje i oslobađanje viriona analizirat će se konfokalnim, 3D cell explorer i elektronskim mikroskopom. Sve navedene analize, uz analizu staničnog transkriptoma i interaktoma glavnih regulatornih proteina koje ćemo provesti, omogućit će identifikaciju glavnih staničnih komponenti koje cilja CMV. Taj korak pretpostavka je za daljnju identifikaciju virusnih gena i funkcija koje preuređuju stanične organele do cVAC te razvijanje strategija za stvaranje novih anti-virusnih lijekova.

Cytomegalovirus (CMV) infection induce extensive reorganization of the membranous system of the cell in which leads to the development of the cytoplasmic virion assembly compartment (cVAC). The reorganization starts early in the infection with the reorganization of early endosomes, recycling endosomes, and the Golgi which form the core of cVAC. In the late phase, the cVAC core is upgraded by the expansion of a membranous organelle around the tegument aggregate that collect viral glycoproteins. Assembly of new virions occur as a multistep transition through the cVAC and ends up in the vacuolar virus-glycoprotein loaded compartment which releases infectious virions. Both, the biogenesis of the final assembly site and mechanisms of virion release are insufficiently characterized. This project is aimed to characterize a phenotype of the virus-glycoprotein loaded compartment and to demonstrate final virus envelopment at this site. Recruitment of Rab and Arf proteins that shape membranous organelles, their regulators (GEFs and GAPs) and effectors will be analyzed by immunofluorescence. Phosphoinositide (PI) composition will be analyzed using the transient expression of fluorescently tagged PI-binding domains and lipid domains using fluorescent recombinant aegerolysins. A new method for visualization of virions will be developed using the Clic-iT technology in order to visualize virion assembly and virion release. The cVAC characterization, virion assembly, and release will be analyzed using confocal, 3D cell explorer and electron microscopy. These analyses, together with an analysis of cellular transcriptome and interactome of major regulatory proteins will enable identification of cellular regulatory components affected by CMV. This step represents a basis for further identification of major viral gene functions that reorganize cell in order to develop cVAC and for further development of antiviral drug-targeting strategies.


nije evidentirano

Znanstveno-istraživački projekti

nije evidentirano

uniri-biomed-18-88

07.03.2019

31.12.2021

nije evidentirano

HRK 233.604,56